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回收率實驗總不合格,忽高忽低?也許是雜質溶解性在作怪!

發布人:冰雨 發布時間:2020-12-19
前言
 

在藥品分析方法建立和驗證的過程中,準確度驗證是其中極為重要的一項。作為分析人員,你是否會遇到回收率實驗總不合格,結果忽高忽低?這也許是雜質溶解性在作怪!以下是我在實際工作過程中對于方法建立、化合物溶解性與回收率方面的一些心得,與大家分享。 

 

對于方法建立起初需要對化合物的性質進行預判,對化合物和其相關雜質的溶解度進行考察,以備選擇正確的稀釋液以及稀釋液配比。

 

如果稀釋液及其比例的選擇不正確,會在分析方法建立之初及方法學驗證階段出現問題。
 


下面是稀釋液配比不一致,造成回收率試驗波動較大的典型案例:
 

準確度驗證原方案
 
稀釋劑:0.1mol/L鹽酸-甲醇(1:9)

 

供試品:取本品約10mg,精密稱定,置50ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸5ml,超聲5分鐘使溶解,放冷至室溫,用甲醇稀釋至刻度,搖勻

 

雜質儲備液:精密稱取雜質對照品2mg,置10ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸1ml使溶解,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取1ml,置20ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(1000%)

 

對照品溶液:精密量取雜質儲備液1ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻

 

回收率溶液:取本品約10mg,精密稱定,置50ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸5ml,超聲5分鐘使溶解,放冷至室溫,加適量甲醇后,分別精密加入雜質混合儲備液各1ml、5ml、7.5ml,分別用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得20%-1、100%-1、150%-1回收率溶液
 
說明:驗證限度為0.5%
 

 

試驗結果
 

第一次:
 


 

第二次:
 



 

分析原因
 

?兩次回收率結果檢測不平行,重現性結果差異大。

 

?增大稱樣量、增大移液體積、更換實驗員操作,排除了人員儀器操作等因素。

 

?分析實驗方案,對比可知對照品溶液和回收率溶液溶劑配比不一致。 

 

① 空白溶劑:0.1mol/L鹽酸-甲醇(1:9)

②對照品溶液溶劑配比:0.1M鹽酸-甲醇(0.0005ml:0.9995)=(1:1999)

③100%回收率溶液溶劑配比:0.1M鹽酸-甲醇(5.0005ml:44.9995)≈(1:9) 

 

?回收率偏高,原因分析: 

 

對照品溶液中雜質峰面積偏小雜質在0.1mol/L鹽酸中易溶解,后步稀釋采用甲醇稀釋,可能會導致該雜質析出,從而使對照品峰面積偏??;因此會導致回收率偏大。

結論:雜質與API受溶解度影響較大,肉眼明視溶液澄清,但內在溶解性存在差異,導致回收率重現性差異較大。

 

驗證試驗

保障稀釋液配比一致,后步稀釋用稀釋劑溶解。
 

雜質儲備液:精密稱取雜質對照品2mg,置10ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸1ml使溶解,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取1ml,置20ml量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,搖勻,即得(1000%)
 
對照品溶液:精密量取雜質儲備液1ml,置10ml量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,搖勻
 

 
經驗總結
 

?各雜質與API溶解性在分析方法建立及驗證中微妙變化會影響實驗結果;

 

?溶劑的選擇、重現性驗證在分析方法建立中尤為重要;

 

?試驗操作精準,排出操作誤差、設備誤差,更有利于結果分析判斷。 
 

溫馨提示:主成分在稀釋劑中的飽和溶解度,最好滿足飽和溶解度大于3倍的供試品濃度!
 
-END-

關于我們:
 

       北京新領先雜質研究事業部,致力于原料藥注冊申報及雜質定向合成,通過雜質定向合成及雜質制備富集,獲取雜質對照品,解決藥物研究中雜質研究難點。通過制定有效的雜質研究和控制策略,降低質量研究工作量,縮短研發周期;創新分析方法,解決常規分析中分離與分析的難點,建立快速、穩定的分析方法。
 

       雜質研究事業部由五個中心組成,分別為雜質對照品中心、質控中心、研發中心、工藝轉化中心和技術服務中心。分別對應于雜質定制、質量研究、工藝開發、工藝轉化和技術服務。部門內擁有GilsonGX-281型制備系統、Agela快速純化系統、創新通恒LC6000制備系統、WatersSFCⅡ型餾分收集系統等。能快速富集雜質,根據MS信息,推測并獲得雜質結構,解決未知雜質來源、傳遞及控制策略。
 

       雜質研究事業部成員均具有多年原料藥開發和雜質制備研究相關經驗,尤其在抗生素領域獲得很多研究成果。目前可提供滿足申報要求的原料藥研發和全套雜質定制服務,歡迎藥界朋友垂詢相關業務。


 

 

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